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    正规的网上买彩票软件: 优宁维为您揭晓凋亡检测操作流程

    上海优宁维生物科技有限公司2016年1月13日 11:09 点击:458

    时时彩网络平台 www.qlgr.net 一、Annexin V 检测凋亡细胞膜的改变

     

    试剂及溶液:

     

    A 对于单独购买的试剂:

     

       a) 10X Binding Buffer (货号:556454)
       b) Propidium Iodide(PI,货号:556463):建议与以下试剂同时使用 Annexin V-FITC(货号: 556420,556419)或 Annexin V-Biotin (货号: 556418,556417) 
       c) Via-Probe? (货号:555816 ):核酸染料7-AAD。建议与以下试剂同时使用Annexin V-PE(货号:556422,556421)或Annexin V-Biotin(货号:556418,556417)。 
       d) 1X PBS Buffer (货号: 554781):8 g NaCl, 0.2 g KCl, 1.44 g Na2HPO 4 7H20, 0.24 g KH2PO4 ,加水至1L。 调整pH值至 7.2。 高压灭菌室温保存。

     

    B.对于凋亡检测试剂盒(货号:556547)

     

       a) FITC Annexin V (组分编号: 51-65874X):每个样本5 μl用量。
       b) Propidium Iodide (PI,组分编号: 51-66211E)):现成的核酸染料。每个样本5 μl用量。 
       c) 10X Annexin V Binding Buffer(组分编号: 51-66121E)

     

    操作步骤:

     

      1. 取Falcon试管,按标本顺序编好阴性对照管和标本管号。
      2. 使用冷的PBS缓冲液洗细胞两次,再用1xBinding Buffer缓冲液制成1x106细胞/ml的悬液。
      3. Falcon试管中加入100μl 细胞悬液。
      4. 按以下体积加入AnnexinV与核酸染料:

     

     

    管号名称荧光标记 Annexin V核酸染料:
    1阴性对照————
    2单阳1AV FITC——
    3单阳2——PI
    4样本AV FITCPI

     

      5.轻轻混匀,室温(20°C ~25°C)避光处放置15分钟。
      6.*使用Annexin V-Biotin试剂进行检测时: 
        ● 1xBinding Buffer缓冲液洗细胞一次,去上清。 
        ● 1xBinding Buffer缓冲液100μl溶解SAv-FITC试剂0.5μg,加入到细胞管中。 
        ● 轻轻混匀。加入5μl PI,室温(20-25°C)避光处放置15分钟。 
      7.各试验管中分别加入1xBinding Buffer缓冲液400μl。1小时内上流式细胞仪测定结果。

     

    Annexin V Blocking

     

    待测细胞与未标记的重组Annexin V预孵育,然后进行实验,是Annexin V细胞凋亡检测的质量控制。原理是预先阻断Annexin V-FITC的结合位点,这样可以证明Annexin V-FITC凋亡分析的特异性。

     

       1. 使用冷的PBS缓冲液洗细胞两次,再用1xBinding Buffer缓冲液制成1x106细胞/ml的悬液。 
       2. 在5ml的培养管中加入100μl细胞悬液(约1x105个细胞)。 
       3. 加入5-15μg纯化的重组Annexin V。注意,不同的细胞系,以及凋亡的不同阶段,其Annexin V位点饱和所需要的纯化的重组Annexin V含量不同。某些情况下,为达到最好效果,可以减少细胞数量,0.5x105个细胞加5-15μg纯化的重组Annexin V。 
       4. 轻轻混匀,室温反应15分钟。 
       5. 加入5μl的Annexin V-FITC或/和PI,轻轻混匀,室温避光处放置15分钟。 
       6. 各试验管中分别加入1xBinding Buffer缓冲液400μl。 
       7. 1小时内上流式细胞仪测定结果。
     

     

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    (来源: 上海优宁维生物科技有限公司


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