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    新手可以上快速路吗: 流式细胞分析中的荧光素你选择对了吗?

    西安百萤生物科技有限公司2019年4月8日 10:24 点击:80

    时时彩网络平台 www.qlgr.net 流式细胞技术(flow cytometry,FCM)是利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析和分选技术。流式细胞术是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电子计算机科学等高度发展及综合利用的高技术产物。当前,流式细胞分析已成为科研发展的一个热点,它应用广泛,主要用于:

    1.测定细胞内 DNA 的变异系数
    2.DNA 倍体分析
    3.借助于荧光染料进行细胞内蛋白质和核酸的定量研究
    4.快速进行细胞分选和细胞收集
    5.医学应用:免疫功能研究各种干细胞的检测,癌症病人的多药耐药性,细胞功能及代 谢
    动力学研究,血小板分析(心血管疾?。?,流式细胞术与分子生物学研究
    6.应用于外周血内皮细胞测定、调节性 T 细胞等尖端领域
    流式技术借助于荧光染料进行细胞内蛋白质和核酸的定量研究,正是科研中所
    应用的重要技术之一。而荧光素则首当其冲成为科研人员荧光标记研究的选择。


    常用的荧光素及其特性
    1.藻红蛋白(PE)
    R-PE/B-PE:是用于生物学检测的超灵敏荧光染料。它们比传统的有机荧光团灵敏 度高 100 倍。其标记的抗体适用于所有配备 488nm 氩离子激光器的流式细胞仪;PE的最大发射波长为 575nm,在流式细胞仪的 FL2 通道检测。
    产品货号 Cat#2556


    2.PE-TexasRed
    PE-Texas Red 是流式细胞仪中常用的的试剂。是由 PE 和 TexasRed(TR)组合而成
    的 Tandem 荧光素。其主要吸收峰位于 565nm,发射峰位于 600nm。其标记的抗体适用于所有配备 488nm 氩离子激光器的流式细胞仪;PE-TR 的最大发射波长为615nm,在流式细胞仪的 FL3 通道检测。
    产品货号 Cat#2619


    3.碘化丙啶(PI)
    碘化丙啶(PI)属于与溴化乙锭相同的化学类别。与溴化乙锭的情况一样,其与荧
    光结合后的荧光增强 20-30 倍。荧光激发最大值红移 30-40nm,荧光发射最大蓝移
    15nm 左右。PI 还与 RNA 结合为 DAPI 和吖.啶橙。PI 通常用于鉴定细胞群中的死细 胞并用作多色荧光技术中的复染剂。它还可用于区分坏死细胞,凋亡细胞和正常细胞。其标记的抗体适用于所有配备 488nm 氩离子激光器的流式细胞仪;PI 的最大 发射波长为 617nm。在流式细胞仪的 FL3 通道检测。
    产品货号 Cat#17517


    4.PE-Cy5
    PE-Cy5 是流式细胞术中常用的试剂,是由 PE 和 Cy5 组合而成的 Tandem 荧光素。 其主要吸收峰位于 565nm,发射峰位于 666nm。 对于这种试剂,建议使用 682/33nm 和 695/40 nm 的滤光片组。其标记的抗体适用于所有配备 488nm 氩离子激光器 的流式细胞仪;PE-Cy5 的最大发射波长为 670nm,在流式细胞仪上用 FL3 通道检测。 产品货号 Cat#2610




    5.紫草素叶绿素(PerCP)
    从藻类植物中分离,它具有极高的消光系数,高量子效率和大的斯托克斯位移。氩
    激光器在 488 nm 处激发,其最大发射峰在 677nm 处,所以它在流式细胞仪的 FL3 通 道 检 测。 PerCP 蛋白通常用于荧光免疫标记,特别是涉及荧光激活细胞分?。‵ACS)的应用。 产品货号 Cat#2559


    6.别藻蓝蛋白(APC)
    别藻蓝蛋白(APC)是从螺旋藻(一种蓝绿藻)中分离的藻胆蛋白。与其他藻胆蛋 白一样,APC 是荧光的,具有极高的吸收率和高量子效率。它是一种蛋白质,通过常规蛋白质交联技术可以很容易地与抗体和其他蛋白质连接,而不会改变其光谱特 征。其标记的抗体适用于配备氦氖激光器发射波长为 633nm 的多色流式细胞仪;APC 最大发射波长为 660nm,在流式细胞仪中只有配有双激光器的 FL4 才能检测。产品货号 Cat#2554




    7.APC-Cy7
    APC-Cy7 是流式细胞仪中常用的试剂。其主要吸收峰位于 651nm,发射峰位于 ~780nm。是由 APC 和 Cy7 组合而成的 Tandem 荧光素;其标记的抗体适用于配备氦氖激光器发射波长为 633nm 的多色流式细胞仪,APC-Cy7 主要用于四色以上的流式细胞术。 产品货号 Cat#2625
    荧光素荧光强度比较


    1. 荧光强度与染色指数有关
    染色指数:SI(Stain Index)=D/W,染色指数越高,荧光强度越好,反之亦反。原理:如果另一个荧光素阳性细胞群的平均荧光强度(MFI)更低,那么 SI 也会降 低。即,随着阳性群的左移,SI 也会降低;如果另一个荧光素产生的阳性细胞群MFI 一样,但是阴性群的基底更宽,即意味着变异系数更大(即使阴性细胞群的 MFI 也是一样的),那么其 SI 也会降低。即,随着阴性群 SD 增大,SI 降低。




    2.荧光强度的其他影响因素
    不同的荧光素亮度还会受到以下因素的影响,例如:
    1. 抗体克隆和抗体质量
    2. 荧光素纯度和质量
    3. 荧光素和蛋白比例(f:p 比例)
    4. 激光和激光器功率
    5. 使用的长通和带通滤光片
    6. 使用的目的细胞


    因此,我们对于不同公司、不同克隆的抗体,即使用了同样的荧光素,也要用SI 进行重新评估,而不是根据现成的排行榜单,因为影响因素很多。根据 SI 计 算,本公司相关产品的荧光强度排名如下:PE>APC>FITC>PerCP
    附双色流式细胞仪荧光素的通道选择

    多色标记荧光素搭配原则:每个通道只能选择一种荧光素;各个通道之间的荧光素可以随意搭配。

    (来源: 西安百萤生物科技有限公司


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