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    彩票走势图制作: ChromoTek产品使用注意事项

    广州胜创生物科技有限公司2015年12月23日 14:27 点击:645

    时时彩网络平台 www.qlgr.net   ChromoTek产品使用注意事项——常见问题解答:

      德国ChromoTek公司成立于2008年,致力于细胞生物学和蛋白质组学的研发与研究。产品包括单克隆抗体、重组单域抗体、荧光抗体、GFP或RFP连接蛋白等。日前,胜创生物公司已成功取得ChromoTek的中国总代理权,ChromoTek的各大产品均可在我司查询订购。


      1、GFP-Trap?可识别的GFP衍生物类型有哪些?

      (1) eGFP, wtGFP, GFP S65T

      (2) TagGFP

      (3) eYFP, YFP, Venus, Citrin

      (4) CFP

      不能识别:TurboGFP,所有的RFPs

      2、RFP-Trap?可识别的RFP衍生物类型有哪些?

      (1) mRFP

      (2) mCherry

      (3) mOrange

      (4) mPlum

      (5) mRuby

      (6) mKate2

      不能识别:DsRed、mRFPruby、TagRFP、所有GFPs

      3、Nano-Trap? (GFP-Trap? / RFP-Trap?) 的结合能力如何?

      Nano-Trap?的结合能力取决于珠子。每10μL浆液,琼脂糖珠可结合2~3μg GFP,磁性颗??山岷?.25-~0.5μg GFP。

      4、可以从GFP-Trap洗脱结合蛋白么?

      关于定量洗脱,可以将样品至于SDS上样缓冲液中95℃煮10min(详见protocol),或者在0.2 M的甘氨酸(pH2.5)中孵化0.5~2min,随后用0.1体积的1M Tris碱中和。

      5、是否可以从GFP-Trap洗脱出自然状态的结合蛋白,比如,在凝胶迁移实验或功能分析实验中?

      可以尝试洗脱游离的GFP。但是,请注意,这种方法,不能定量洗脱出目标融合蛋白。

      6、怎样才能避免非特异性的蛋白与GFP-Trap交互作用而结合?

      关键操作步骤,是在孵化液中稀释洗涤剂的浓度。我们建议,洗涤剂为终浓度0.1%(如NP-40 或TX-100),且最终体积不少于0.4mL。另外,我们建议,要测定各种洗涤缓冲液的盐浓度,使其范围在150mM-500mM范围内,以去除非特异性结合的亲水性蛋白。

      7、在binding过程中,N-端与C-端GFP融合蛋白之间是否存在差异?

      GFP-Trap?对C-末端的GFP融合蛋白的亲和力稍高,若要消除这种差异,可以加长孵化时间(1-2h取代15-30min)

      8、是否可以在组织样品(即变性缓冲液)中直接纯化GFP标记的融合蛋白?

      原则上,GFP-Trap?即使在恶劣的缓冲条件下(如,RIPA缓冲液,含0.1%SDS或1M尿素),也非常稳定。

      9、可结合的GFP-Trap?珠的GFP结构,是否有大小限制?

      无。

      10、如果在洗脱液中,有剩余的背景怎么办?

      建议使用Chromotek的blocked particles(bab-20 or bmp-20)对样品进行预处理。

      胜创生物 www.shengchuangbio.com 微信公号sc-bios 服务热线4006-400-850


    (来源: 广州胜创生物科技有限公司


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