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    江苏快3怎么玩的: 【技术】基因敲除抗体验证

    武汉华美生物工程有限公司2018年4月26日 13:58 点击:369

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    抗体,一方面是免疫诊断试剂研发的原料,另一方面是免疫诊断试剂检测的对象。它一直是生物科学领域的主力,可是它的可靠性一再让研究人员处于窘境。长期以来,抗体产品本身都存在着无法避免的质量隐患。由于抗体质量造成的全球科研经费损失高达8亿美元,直接占到了整个科研抗体市场价值总量的三分之一以上。为了避免出现质量抗体问题,提高试验可重复性的最有效方法,恰恰是抗体验证。


    亲和结合物/抗体是生命科学中最常用的工具之一,用于研究蛋白以及它们在各种生物通路和疾病中的功能。这些工具的特异性和灵敏度能帮助人们轻松地确认各种表达水平的特定蛋白。

    但是越来越多的研究表明不是所有的这些工具都是特异的,这给实验的可重复性带来日益增加的问题,造成时间和资源的浪费甚至一些情况下文章的召回。

    抗体是生命科学领域最常用的工具之一。最常使用WB检测复杂样品中的某种蛋白,并对其进行定量分析。此外,它们也被用于免疫组化和免疫荧光染色,以便于在显微镜下可视化地观察蛋白,以及其它各类基于抗体会与特定生物分子结合的实验。

     

    验证抗体要比验证细胞复杂的多??固迨欠衲苷饭ぷ饕淳咛宓氖匝?。例如,有的抗体能够检测到变性的蛋白,却不能检测到未变性的蛋白,或者相反。在某种组织中工作良好的抗体,可能在其他组织或背景中给出假信号。我们也强调抗体的验证要针对其应用和背景来开展。


    抗体特异性最被接受和信任的验证方法之一是敲除验证。


    在一个敲除细胞株中,由于表达特定靶标蛋白的基因被清除也称为敲除,蛋白靶标并不存在。实验结果会与对照细胞株(或野生型)平行比较。如果抗体是真的特异的,在敲除细胞株中就不会检测到结果,但在对照细胞株中就会检测到特定的信号。敲除验证提供了一个完全阴性的对照组来确认抗体对特定靶标蛋白的特异性。


    华美生物敲除抗体验证示例:

    ——HAT1兔多抗特异性敲除验证


    编辑前序列.png

    ▲编辑前的序列

    编辑后序列.png

    ▲编辑后的序列

    我司基因敲除的细胞株的测序结果,基因编辑后,翻译终止,该靶标蛋白不表达。

    基因敲除后,做的WB验证--该图片在网站上有.jpg

    ▲基因敲除后做的WB实验

    WT: Wild-type 293 cells
    KO: Knockout 293 cells

    HAT1.jpg

    HAT1抗体已经过ELISA, WB, IF验证


    华美生物对待科研一直秉承严谨的态度!

    如果您看到上图所示的敲除验证的标示,您可以确认这个抗体不仅被所推荐的应用和物种验证过,而且它的特异性也被我们自己实验室的敲除验证确认过。



    二维码.jpg

    — END—

    —华美生物|让科研变得有温度

    —YOUR GOOD PARTNER IN BIOLOGY RESEARCH!


    (来源: 武汉华美生物工程有限公司


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