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    江苏体彩网: 原代细胞的培养和维持

    互联网2010年2月26日 18:35 点击:2129

    时时彩网络平台 www.qlgr.net 一、原代细胞的培养与维持

    1、静置贴壁细胞(包括半贴壁细胞的培养)

    凡经消化液处理实体组织来源的细胞要通过充分漂洗,以尽量除去消化液的毒性,细胞接种时浓度要稍大一些,至少为5×108细胞/L,培养基可用Eagle(MEM)或DNEM培养,小牛血清浓度为10%~80%。在起始的2天中尽量减少振荡,以防止刚贴壁的细胞发生脱落,漂浮。

    贴壁细胞长成网状或基本单层时,由于营养缺乏,代谢产物增多,pH变酸,不适宜细胞生长,此时细胞还未长成单层,未达到饱和密度,仍需继续培养,因此,需采取换液方式来更新营养成分以满足细胞继续生长繁殖的需要。其换液方法比较简单,即弃去旧液,加入与原培养液相同的等量完全培养基。

    2、悬浮细胞的培养

    凡来自外周血、胸腹水、脾脏、淋巴结、骨髓的淋巴细胞、造血干细胞以及白血病细胞,在原代培养时要尽量去除红细胞。若要将淋巴细胞及白血病细胞进行长期培养,淋巴细胞中要加入生长因子,白血病细胞中要加入少量的原患者血清,以利细胞生长,待细胞开始增殖甚至结成小团块,培养基中pH变酸,说明细胞生长繁殖良好,一般每隔3天需半量换液一次(换液时尽量使细胞不丢失),待细胞增殖加快,浓度明显增加,pH发生明显变化时,此时可考虑传代。

    悬浮细胞在未达到饱和密度时,但培养基中的营养成分并不能维持细胞的营养需求时,只能采用半量换液的方式。

    二、原代细胞培养的首次传代 (Subculture)

    这种使原代细胞经分散接种的过程称之为传代。每进行一次分离再培养称之为传一代,传至5~10代以内的细胞通常称为次代培养细胞,传至10~20代以上的细胞,通常确定为传代细胞(或称传代细胞系)。传代细胞系的建立,关键是初代培养的首次传代。应注意如下几点:

    (1)细胞生长密度不高时,或未能达到覆盖整个瓶底时不能急于传代。

    (2)原代培养的贴壁细胞多为混杂细胞,形态各异,往往是上皮样细胞和成纤维样细胞并存,采用胰蛋白酶消化时要掌握好消化时间,因成纤维细胞易于脱壁,上皮细胞不易脱壁,因此,可根据需要选用适当的消化时间及时中止消化。在早先传代时,其消化时间比一般已建系的细胞相对长一些。

    (3)吹打已消化的细胞要轻巧,既不能听到有明显的吹打声,又不能有大量泡沫在悬液中形成,以尽可能减少对细胞的机械损伤。

    (4)首次传代时细胞接种数量要多一些,以利于细胞的生存和繁殖。如果消化分离的细胞悬液有组织块,也一并传入到培养瓶,尽量减少细胞损失。

    (5)首次传代培养时的pH不能高,宁可偏低一些。此外,小牛血清浓度可适当加大至15%~20%左右。

    (来源: 互联网 )


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