• 李克强:扩大跨省异地就医直接结算范围 2019-08-11
  • 次仁卓玛一家的端午节 2019-08-11
  • 市人大常委会召开党组会议传达学习全国两会精神张轩主持并讲话 2019-08-09
  • 世界杯期间在家撸串的正确姿势-热门标签-华商网数码 2019-08-06
  • 兴业银行获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-08-02
  • 宝马中国创新日暨上海研发中心揭幕 专注于高新技术 2019-08-01
  • 解放军报评论员:担当起党和人民赋予的新时代使命任务 2019-08-01
  • 别人家的中年男子 听音识木一把琴能卖30万 2019-07-18
  • 《贪婪之秋》延期至2019年 E3新宣传片公开 2019-06-25
  • 《关于发展租赁型职工集体宿舍的意见(试行)》正式发布实施 2019-06-24
  • 网约车陷阱多 谨防四类风险 2019-06-19
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-06-19
  • 歌浴森专辑写真曝光 俏皮可爱萌态十足 2019-06-09
  • 破11个赛季不胜魔咒 山东客场击败广厦 2019-06-09
  • 喝了6瓶劲酒和1斤白酒 男子手持钢锯在重庆西站撒泼遭控制 2019-06-01
  • 来宝网Logo

    热门词:生物显微镜 水质分析仪 微波消解 荧光定量PCR 电化学工作站 生物安全柜

    现在位置时时彩网络平台>技术资料首页>产品信息>说明书>大鼠细胞色素C(Cyt-C)ELISA试剂盒使用说明书

    重庆时时彩有可能赢吗: 大鼠细胞色素C(Cyt-C)ELISA试剂盒使用说明书

    厦门慧嘉生物科技有限公司2010年6月10日 16:08 点击:1039

    时时彩网络平台 www.qlgr.net  

    大鼠细胞色素C(Cyt-C)ELISA试剂盒使用说明书

    本试剂盒仅供体外研究使用!

    预期应用

    ELISA法定量测定大鼠组织匀浆或其它相关生物液体中细胞色素C(Cyt-C)含量。

     

    实验原理

    用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗 Cyt-C抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗 Cyt-C抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物 TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 Cyt-C呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度( OD值),计算样品浓度。

     

    试剂盒组成及试剂配制

    1.        酶联板:一块(96孔)

    2.        标准品(冻干品): 2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为20 ng/ml,做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后,分别稀释成20 ng/ml,10 ng/ml,5 ng/ml,2.5 ng/ml,1.25 ng/ml,0.625 ng/ml,0.312 ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml,临用前15分钟内配制。如配制10 ng/ml标准品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 20 ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。

    3.        样品稀释液:1×20ml。

    4.        检测稀释液A:1×10ml。

    5.        检测稀释液B:1×10ml。

    6.        检测溶液A:1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔),实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。

    7.        检测溶液B:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。

    8.        底物溶液:1×10ml/瓶。

    9.        浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

    10.    终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

    11.    覆膜:5张

    12.    使用说明书:1份

     

    自备物品

    1.   酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热)

    2.   微量加液器及吸头,EP管

    3.   蒸馏水或去离子水,全新滤纸

     

    标本的采集及保存

    1.        组织匀浆:将动物的组织标本先用PBS洗涤,去除多余血液,匀浆化后放在5~10 ml PBS中于-20℃放置过夜,第二天,经过二次反复冻融破膜,将匀浆物5000x g离心5分钟,取上清即可检测。

    2.        其它生物标本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

    注:以上标本置4保存应小于1周,-20-80均应密封保存,-20不应超过1个月,-80不应超过2个月;标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

     

    操作步骤

    实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试 剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

    1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔??瞻卓准友废∈鸵?100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

    2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加 检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

    3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

    4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

    5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

    6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

    7.        依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

    8.        用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后立即进行检测。

     

    1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。

    2.  加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的 “预孵育”时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)最好控制在 10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。

    3.   孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

    4.   洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响最后的酶 标仪读数。

    5.  试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请精确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。

    6.  反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

    7.  底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。

        建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。

        如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数。

     

    洗板方法

    1. 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。

    2. 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

     

    特异性

        本试剂盒可同时检测重组或天然的大鼠Cyt-C,且与其它相关蛋白无交叉反应。

     

    计算

     以标准物的浓度为纵坐标(对数坐标), OD值为横坐标(对数坐标),在对数坐标纸上绘出标准曲线。推荐使用专业制作曲线软件进行分析,如 curve expert 1.3,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

     

    检测范围:0.312 ng/ml - 20 ng/ml

     

    最低检测限:0.078 ng/mL

     

    说明

    1.         在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染,试剂避免受到微生物的污染,因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。

    2.         试剂盒保存:请收到试剂盒后尽快将标准品、检测溶液A和检测溶液B保存于-20℃,其余试剂短期保存请置于4℃,长期保存则置于-20℃。

    3.         浓洗涤液会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。

    4.         刚开启的酶联板孔中可能会有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。

    5.         所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

    6.         有效期:6个月。

     

    厦门慧嘉生物科技有限公司专业代理众多国际生命科学领域的知名品牌。致力于各种ELISA试剂盒、免疫组化试剂盒、一抗二抗、细胞因子、生物试剂、移液器、耗材的销售推广及服务工作。
    咨询电话:0592-6020891     //www.biohj.com QQ:1284882975

     

     

    (来源: 厦门慧嘉生物科技有限公司


    全年征稿 / 资讯合作

    联系邮箱:[email protected]

    版权与免责声明

    • 凡本网注明“来源:来宝网”的所有作品,版权均属于来宝网,转载请必须注明来宝网, 时时彩网络平台,违反者本网将追究相关法律责任。
    • 本网转载并注明自其它来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
    • 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。
  • 李克强:扩大跨省异地就医直接结算范围 2019-08-11
  • 次仁卓玛一家的端午节 2019-08-11
  • 市人大常委会召开党组会议传达学习全国两会精神张轩主持并讲话 2019-08-09
  • 世界杯期间在家撸串的正确姿势-热门标签-华商网数码 2019-08-06
  • 兴业银行获第十二届人民企业社会责任奖年度企业奖 2019-08-02
  • 宝马中国创新日暨上海研发中心揭幕 专注于高新技术 2019-08-01
  • 解放军报评论员:担当起党和人民赋予的新时代使命任务 2019-08-01
  • 别人家的中年男子 听音识木一把琴能卖30万 2019-07-18
  • 《贪婪之秋》延期至2019年 E3新宣传片公开 2019-06-25
  • 《关于发展租赁型职工集体宿舍的意见(试行)》正式发布实施 2019-06-24
  • 网约车陷阱多 谨防四类风险 2019-06-19
  • 太原设禁鸣路段 设备在测试中 2019-06-19
  • 歌浴森专辑写真曝光 俏皮可爱萌态十足 2019-06-09
  • 破11个赛季不胜魔咒 山东客场击败广厦 2019-06-09
  • 喝了6瓶劲酒和1斤白酒 男子手持钢锯在重庆西站撒泼遭控制 2019-06-01
  • 排列五排列五走势图 上海基诺彩票开奖结果 内蒙古时时彩平台 捕鱼来了 119期两码中特免费公开 幸运赛车走势图 透码精英 黑龙江22选5走势图表 福彩3d字谜图谜总汇图 cba联赛 2019中超比赛直播 体育彩票足球 广东南粤风采36选7最新开奖结果 足彩19070期简析 重庆时时彩辅助软件