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    重庆时时彩庄闲和: 新产品推介—苹果酸脱氢酶(MDH)

    武汉华美生物工程有限公司2016年11月5日 11:00 点击:726

    时时彩网络平台 www.qlgr.net 苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH,EC 1.1.1.37)广泛存在于动、植物和微生中,可以催化草酰乙酸与苹果酸之间的可逆转换。MDH可催化草酰乙酸生成苹果酸,使NAD+生成NADH,为硝酸还原过程提供还原力;胞质中生物氧化产生的NADH不能通过线粒体内膜,但NADH 可在MDH作用下将氢交给草酰乙酸生成苹果酸,后者可通过苹果酸-天冬氨酸穿梭系统被运送到线粒体基质,线粒体基质中的苹果酸被重新氧化成草酰乙酸和NADH,然后通过呼吸链进行氧化MDH广泛分布在生物体内。

     

    苹果酸脱氢酶是一种活性最强的酶,存在于乙醛酸体(gMDH)、线粒体(mMDH)、过氧化物体(pMDH)、叶绿体(plMDH)、细胞浆(cMDH)、以及锥虫甘油体内,依生物体的功能不同、组织的差异、细胞内定位的不同其表达的种类不同,具有多种同工酶形式。其功能包括:催化草酰乙酸盐与苹果酸盐进行相互转化时,苹果酸脱氢酶可以NAD或NADH为辅因子。


    苹果酸脱氢酶(MDH)

    科赛格最新研发的苹果酸脱氢酶(MDH),通过生化平台对其进行酶学性质、固体稳定性、临床等性能方面进行反复验证,以一家高质量的试剂盒作为比对试剂,在同样的条件下对多个随机样本测值,发现两者之间有很好的临床相关性,可以用于体外诊断。



    稳定性

    MDH冻干粉稳定性

    分别制备三批MDH冻干粉,将其放置 37℃热破14天后,分别与放置在-20℃的MDH冻干粉比对,检测其酶活。如表1显示,说明MDH冻干粉稳定性良好。

    表1 MDH冻干粉稳定性



    天门冬氨酸氨基转移酶
    检测试剂稳定性

    将MDH冻干粉制备成天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒,将其放置37℃热破14天后,分别与放置在4℃的试剂盒比对,进行检测临床(校准品浓度42U/L)。如表2显示,说明MDH试剂稳定性良好。

    CV:变异系数

    表2天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂稳定性


    临床比对

    利用科赛格自产天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂与一家高质量天门冬氨酸氨基转移酶诊断试剂(天门冬氨酸氨基转移酶正常范围为8-40 U/L)同时测80例临床样本(如图1),结果显示两组试剂临床相关性高达0.99,说明科赛格生产的天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂可以应用于临床检测。

     

    图1 临床比对


    准确度

    利用科赛格自制天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂检测相关质控品,用同一批次的试剂检测2个水平的第三方质控品,实际检测平均值与目标靶值相对偏倚<4%,证明准确度高。

    表3 天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂准确度


    精密度

    自制天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂对2份定值血清重复测试10次,计算出批内变异系数。如表4显示,变异系数CV<6%,证明葡萄糖检测试剂精密度高。

    表4 天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂精密度


    最适反应pH酶学性质

    制备不同的缓冲液(100 mM,pH 5.5-8.0 K-phosphate;pH 7.5-8.5 Tris-HCl;pH 8.0-9.0Borate)在37℃条件下,检测其酶活。如图2所示,MDH的最适反应pH在7.5-8.0之间。

     

    最适反应pH

    (37,100 mM缓冲液:pH 5.5-8.0 K-phosphate;pH 7.5-8.5 Tris-HCl;pH 8.0-9.0 Borate


    最适反应温度:

    制备100 mM K-phosphate pH 7.5的缓冲液,在不同温度下检测其酶活。如图3所示,MDH的最适反应温度为60℃。

      

    最适反应温度

    100 mM K-phosphate,pH 7.5


    pH稳定性

    制备不同的缓冲液(100 mM缓冲液:pH 2.0-3.5 Glycine-HCl;pH 4.0-5.0 Na-phosphate-citrate;pH 5.5-8.0 K-phosphate;pH 8.0-9.0 Tris-HCl;pH 9.5-10.5 CAPS-NaOH;pH 11.0-12.0 Na-phosphate-NaOH),MDH液体酶加入试剂中使最终浓度为15 U/mL,然后在37℃条件下处理30 min之后,检测其酶活。如图4所示,MDH在pH 3.0-9.0最稳定。

     

    4 pH稳定性

    37℃,处理30 min,100 mM缓冲液:pH 2.0-3.5 Glycine-HCl;pH 4.0-5.0 Na-phosphate-citrate;pH 5.5-8.0 K-phosphate;pH 8.0-9.0 Tris-HCl;pH 9.5-10.5 CAPS-NaOH;pH 11.0-12.0 Na-phosphate-NaOH;酶浓度:15 U/mL


    温度稳定性

    制备100 mM K-phosphate pH 7.5的缓冲液,MDH液体酶加入试剂中使最终浓度为20 U/mL,在不同温度下处理30 min后,检测其酶活。如图5所示,温度在45-65℃时MDH比较稳定。

     

    温度稳定性

    处理30 min,100 mM K-phosphate pH 7.5,酶浓度:20 U/mL


    抑制剂因素

    制备100 mM Tris-HCl pH 7.5的缓冲液,MDH液体酶加入试剂中使最终浓度为20 U/mL,在37℃下处理15 min后,检测其酶活。如表5所示,EDTA-2K、Tween-20和NaN3对其有激活作用。

    抑制剂影响因素

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    (来源: 武汉华美生物工程有限公司


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