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    时时彩怎么才能稳赚: 细胞周期的测定

    武汉鸿雨新科技有限公司2010年6月11日 14:17 点击:1277

    时时彩网络平台 www.qlgr.net 一、原理
    细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。
    单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法,但它不能代表细胞群体的周期,故现多采用其他方法测群体周期。
    测定细胞周期的方法很多,有同位素标记法、细胞计数法等,这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。
    BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)加入培养基后,可做为细胞DNA复制的原料,经过两个细胞周期后,细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2,反映在染色体上
    应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期,则染色体中约一半为两条单体均浅染,另一半为一深一浅。细胞如果仅经历了一个周期,则两条单体均深染。计
    分裂相中各期比例,就可算出细胞周期的值。
    二、仪器、用品与试剂
    1、仪器、用品:同常规细胞培养
    2、试剂:BrdU(1.0mg/ml),甲醇、冰醋酸,Giemsa染液,秋水仙素,2×SSC液
    三、操作步骤
    1、细胞生长至指数期时,向培养液中加入BrdU,使最终浓度为10μg/ml。
    2、44小时加秋水仙素,使每ml中含0.1μg。
    3、48小时后常规消化细胞至离心管中,注意培养上清的漂浮细胞也要收集到离心管中。
    4、常规染色体制片(见第三部分:染色体技术)。
    5、染色体玻片置56℃水浴锅盖上,铺上2×SSC 液,距紫外灯管6cm处紫外照射30分钟。
    6、弃去2×SSC液,流水冲洗。
    7、Giemsa液染色10分钟,流水冲洗,晾干。
    8、镜检100个分裂相,计第一、二、三、四细胞期分裂指数。
    9、计算:
    细胞周期(Tc)=48/{(M1+2M2+3M3+4M4)/100}(小时)
    附:(1)BrdU配制: BrdU 10mg十双蒸水10ml 4℃下避光保存。
    (2)2×SSC配制: NaCl 1.75克,柠檬酸三钠·2H2O 0.88克,加水至100ml,4℃保存。

    (来源: 武汉鸿雨新科技有限公司


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