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    abs9229 RIPA Lysis Buffer (Strong)

    价    格:360

    产    地:上海更新时间:

    品    牌:absin型    号:abs9229

    状    态:正常点击量:34

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    等     级: (第 9年)

    性     质:生产型,服务型,

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    产品参数

    保存方法-20℃冻存,1年稳定。
    分子量174.2 g/mol
    操作步骤
    如发现RIPA有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
    根据使用量,取每1mlRIPA加入10ulPMSF,使PMSF的最终浓度为1mM,混匀备用(PMSF现用现加)。
    1. 样品前处理:
    a) 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
    b) 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必须分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
    c) 对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
    2. 将裂解后的样品10000-14000离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。
    用法说明
    注意事项:
    本试剂为强烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同时,也会将基因组一并释放出来,若细胞量多会造成细胞裂解液粘稠:此时可以直接加入蛋白上样缓冲液,煮沸再离心,离心后直接上样电泳;若想测定浓度,可加入少量SDS(1%),煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂,所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒,请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
    如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物,随后离心取上清。

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    产品介绍

    描述

    ?RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer),本意为 Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对组织和细胞都有较好的裂解作用。RIPA 的配方有很多种,根据其裂解强度的不同,大致可分为强、 中、弱三类,应用上会有一些差异。

    本品为裂解性较强的 1×RIPA 裂解液,主要成分为 50mM Tris-HCl (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% 脱氧胆酸钠,0.1% SDS,以及正钒酸钠,氟化钠,EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂,可广谱且有效抑制蛋白 降解,经本品裂解所得的蛋白样品,适用于蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫沉淀(IP),和免疫共沉淀(Co-IP)等实验。经本品裂解收集的蛋白样品,可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒 测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的去垢剂,不适合用 Bradford 法来测定总蛋白浓度。

    ?

    别名RIPA裂解液(强)
    产品组分主要成分为 50mM Tris-HCl (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% 脱氧胆酸钠,0.1% SDS,以及正钒酸钠,氟化钠,EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂 有效成分为1% Triton X-100,1%脱氧胆酸钠,0.1% SDS




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